分子生物工具书之：核苷酸纯化-DNA

▋ DNA 则有化一门

人们从前对 DNA 的分析，举例来说是通过多重 PCR、real-time PCR 和对独有意外事件的分析来完成的，因此相比之下则有化 DNA 非常重要。相比之下的分析产物是获得相比之下的中游验证结果的必要必需。我们能够了解 DNA 则有化种系统的兼职定律，然后针对后续应用考虑最适合的工程学步骤。

DNA 则有化罕见的终究

● 硫化样品从而释放出来 DNA● 将 DNA 大分子与上皮细胞、核糖体、果糖和 RNA 等其他大分子分立● 始终保持 DNA 大分子的持续性

DNA 是从不同随之而来的终究也不同。例如巧克力等食品，其中会含减缓性的氟化物，如果这些氟化物被已则有化的 DNA 装载，则也许减缓中游的验证。从革兰氏阳性细菌中会分立 DNA 必需高效的硫化细菌厚厚的肽聚糖细胞会壁。一定要确保你用到的 DNA 则有化步骤能够解决取样随之而来的难题。

人情味上会：体液和组织取样在用到前需冷冻保存，以最大限度核糖体酶对 DNA 的毁坏。在取出一小部分完成 DNA 则有化在此之后需将某种原因后的体液完全融合。

DNA 则有化基本步骤

DNA 则有化：硫化、相结合和冲洗

硫化：毁坏细胞会或组织-酶处理步骤-机械设备毁坏-去垢剂处理步骤

硫化：使核糖体复合或失去活性-镁去垢剂、冷却、还原剂、尿素和醯类-酵素（如酵素 K）

硫化：使内源性核糖体酶-苯甲酸（例如 EDTA）-酵素（例如 酵素 K）

相结合与冲洗：分立 DNA-转换成其他核糖体（如 RNA）-转换成核糖体 •有机精油 •卤析 •与固相表现形式相结合 -铪基质 -卤化物共享石柱 -带电胶体

相结合与冲洗：从其他细胞会物质中会分立 DNA 的步骤

■ 有机精油

当丙酮或丙酮: 液态与细胞会硫化物融合时，会产生两相：水相和有机相。分子会 DNA 大分子带入分子会相或「水相」，而复合的核糖体和其他细胞会散落则带入有机相。

■ 卤析

卤可以让核糖体脱水，从而降偏高其粘性，然后复合，复合后的核糖体丧失水和从而水合；通过离心法转换成水合的核糖体和细胞会散落。都用的卤最主要最主要氯化钠、乙酸钾或乙酸铵。

■ 与固相表现形式相结合

绝大多数的 DNA 则有化步骤主要依据的定律是：通过考虑性地与固相表现形式相结合, 从而从粗硫化物中会则有化 DNA。这类固相表现形式最主要铪表现形式和卤化物共享树脂。举例来说来说，用到固相表现形式则有化 DNA 比其他步骤用时更为短、操控更为便捷，因为不必需任何有机溶剂，而且可以微型化和高效率从而实现高通量。

与 DNA 相结合的固相表现形式类型

铪基质：DNA 会在高剂量离液卤（例如卤酸醯）不存在的情况下与铪相结合，但是核糖体不会。可以用到含乙醇的冲洗液施用卤，然后在偏高镁准确度的水溶液（例如 TE 或水）中会开脱 DNA。

卤化物共享石柱：则有化的主要定律是 DNA 中会带负电荷的磷酸双键与共享石柱上带负电的大分子间相互作用。在偏高卤必需下，DNA 与表现形式相结合，而核糖体和 RNA（有所不同所用的酿酒酵母）则被冲洗施用。DNA 可以用高卤酿酒酵母开脱。

在胶体表层完成的 DNA 带电分立：许多商品化试剂盒的兼职定律是用到带电胶体从水溶液中会捕捉 DNA。带电胶体可以由铪等物料做成，DNA 的相结合和开脱有所不同卤剂量或 pH。

DNA 、剂量和持续性

则有的、值得注意的 DNA 对于许多中游验证至关重要。都用分析 DNA 的都用步骤是在 260nm 的频率处（DNA 在该频率下有最主要抽收西坡）验证取样抽表面温度。通过验证 280nm 频率处的抽表面温度，并且量化 260nm 与 280nm 处的抽表面温度之比，可以验证出则有化步骤中会也许用到到的或残留在取样中会的其他有机氟化物。白光染料和 qPCR 是量化 DNA 剂量并确定制品持续性的替代步骤，主要在本指南后续关于核糖体计量篇章完成详实咨询。

图片是从：普洛麦格